Spas ji bo serdana Nature.com. Guhertoya geroka ku hûn bikar tînin piştgirîya CSS-ê sînordar e. Ji bo encamên çêtirîn, em pêşniyar dikin ku gerokek nûtir bikar bînin (an jî moda lihevhatinê ya di Internet Explorer de neçalak bikin). Di vê navberê de, ji bo misogerkirina piştgirîya domdar, em ê malperê bêyî şêwaz û JavaScript nîşan bidin.
Damezrandina modelên heywanan ên guherîna modîk (MC) bingehek girîng e ji bo xwendina MC. Pêncî û çar kevroşkên Spî yên Zelanda Nû li koma operasyonê ya xapînok, koma implantasyona masûlkeyê (koma ME) û koma implantasyona nucleus pulposus (koma NPE) hatin dabeş kirin. Di koma NPE de, dîska intervertebral bi nêzîkatiya neştergerî ya anterolateral lumbar hate eşkere kirin û derziyek hate bikar anîn da ku laşê vertebral L5 li nêzî plakaya dawîn qul bike. NP ji dîska intervertebral L1/2 bi sirincekê hat derxistin û tê derzîkirin. Di hestiyê subkondralê de qul dikolin. Pêvajoyên neştergerî û awayên sondajê yên di koma implantasyona masûlkan û koma emeliyata xapînok de mîna yên di koma implantasyona NP de bûn. Di koma ME de perçeyekî masûlkeyê xistine qulikê, di koma operasyonên şemitî de jî tiştek nexistine kunê. Piştî emeliyatê skanandina MRI û testa biyolojiya molekulî hat kirin. Nîşana di koma NPE de guherî, lê di koma operasyonê ya sham û koma ME de ti guhertinek nîşanek eşkere tune. Çavdêriya histolojîk destnîşan kir ku belavbûna tevna nenormal li cîhê implantasyonê hate dîtin, û vegotina IL-4, IL-17 û IFN-γ di koma NPE de zêde bû. Implantasyona NP di hestiyê subkondral de dikare modelek heywanek MC çêbike.
Guhertinên Modic (MC) birînên paçikên vertebral û mêjûya hestiyê cîran in ku li ser wênekêşiya rezonansê magnetîkî (MRI) têne xuyang kirin. Ew di nav kesên ku bi nîşanên têkildar re pir gelemperî ne. Gelek lêkolînan tekezî li ser girîngiya MC kiriye ji ber têkiliya wê bi êşa pişta nizm (LBP) 2,3. de Roos et al.4 û Modic et al.5 bi awayekî serbixwe pêşî sê cûreyên cûda yên anormaliyên nîşana subchondral di mêjûya hestiyê vertebral de diyar kirin. Guhertinên modîk ên tîpa I li ser rêzikên bi giraniya T1 (T1W) hîpointens in û li ser rêzikên bi giraniya T2 (T2W) hîperîntens in. Ev birîn di mêjûya hestî de paçikên şikestî û tevna granulasyona damarî ya cîran eşkere dike. Guhertinên Modic type II li ser her du rêzikên T1W û T2W sînyala bilind nîşan didin. Di vê celebê zerarê de, hilweşîna endplate dikare were dîtin, û her weha veguheztina rûniya histolojîk a mêjûya hestiyê cîran. Guhertinên Modic type III di rêzikên T1W û T2W de nîşanek kêm nîşan dide. Birînên sklerotîk ên ku bi paçikên paşîn re têkildar in6 hatine dîtin. MC wekî nexweşiyek patholojîkî ya stûyê tê hesibandin û ji nêz ve bi gelek nexweşiyên dejeneratîf ên stûyê ve girêdayî ye7,8,9.
Li gorî daneyên berdest, gelek lêkolîn di derbarê etiolojî û mekanîzmayên patholojîkî yên MC de nerînên berfireh peyda kirine. Albert et al. Pêşniyar kir ku MC dibe ku ji ber herniya dîskê8 çêbibe. Hu et al. MC bi dejenerasyona giran a dîskê ve tê girêdan10. Kroc têgeha "şikandina dîska hundurîn" pêşniyar kir, ku diyar dike ku travmaya dîskê ya dubare dibe ku bibe sedema mîkrotîrên di dawiya paşîn de. Piştî damezrandina şikilê, hilweşîna paşîna paşîn ji hêla nucleus pulposus (NP) ve dibe ku bersivek otoîmmune çêbike, ku bêtir dibe sedema pêşveçûna MC11. Ma et al. nêrînek bi heman rengî parve kir û ragihand ku xweseriya NP-ê-hilberkirî di pathogenesis MC12 de rolek sereke dilîze.
Hucreyên pergala berevaniyê, nemaze lîmfosîtên arîkar CD4+ T, di pathogenesis otoîmunîteyê de rolek girîng dilîzin13. Binkoma Th17 ya ku vê dawiyê hatî vedîtin cytokine IL-17-a proînflamatuar çêdike, îfadeya kemokîn pêşve dike, û hucreyên T di organên zirardar de teşwîq dike da ku IFN-γ14 hilberîne. Hucreyên Th2 di heman demê de di pathogenesis bersivên parastinê de rolek bêhempa dileyzin. Îfadekirina IL-4 wekî şaneyek nûnerê Th2 dikare bibe sedema encamên giran ên immunopatholojîk15.
Her çend gelek lêkolînên klînîkî li ser MC16,17,18,19,20,21,22,23,24 hatine kirin, hîn jî kêmbûna modelên ceribandinê yên heywanan ên guncan hene ku dikarin pêvajoya MC-ya ku pir caran di mirovan de diqewime û dikare bibe mînak. ji bo lêkolîna etiolojî an dermankirinên nû yên wekî terapiya armanckirî tê bikar anîn. Heya nuha, tenê çend modelên heywanan ên MC hatine ragihandin ku mekanîzmayên patholojîk ên bingehîn lêkolîn dikin.
Li ser bingeha teoriya otoîmmune ya ku ji hêla Albert û Ma ve hatî pêşniyar kirin, vê lêkolînê modelek MC ya kevroşkê ya sade û ji nû ve hilberandinek bi ototransplanta NP-ê li nêzikî plakaya dawiya vertebral a lêkirî ava kir. Armancên din çavdêrîkirina taybetmendiyên histolojîkî yên modelên heywanan û nirxandina mekanîzmayên taybetî yên NP di pêşkeftina MC de ye. Ji bo vê armancê, em teknîkên wekî biyolojiya molekular, MRI, û lêkolînên histolojîk bikar tînin da ku pêşkeftina MC-ê bixwînin.
Di emeliyatê de 2 kêvroşk, di dema MRI de jî ji ber bêhişbûnê mirin. 48 kêvroşkên mayî sax man û piştî emeliyatê tu nîşaneyên behre û neurolojîkî nîşan nedan.
MRI nîşan dide ku tundiya sînyala tevna pêçandî ya di kunên cûda de cûda ye. Zêdebûna sînyala laşê vertebral L5 di koma NPE de hêdî hêdî di 12, 16 û 20 hefteyên piştî danînê de hate guheztin (Rêza T1W sînyala kêm nîşan da, û rêza T2W sînyala tevlihev plus sînyala kêm nîşan da) (Hêjî. 1C), dema ku xuyangên MRI ji her du komên din ên parçeyên bicîbûyî di heman heyamê de bi îstîqrar mabûn (Wêne. 1A, B).
(A) MRI-yên li dû hev ên temsîlkar ên stûna kevroşkê di 3 xalên demê de. Di dîmenên koma operasyonên xapînok de tu anormaliyên sînyalê nehatin dîtin. (B) Taybetmendiyên îşaretê yên laşê vertebral di koma ME de mîna yên di koma operasyonê ya xapînok de ne, û bi demê re li cîhê vegirtinê ti guhertinek nîşana girîng nayê dîtin. (C) Di koma NPE de, sînyala kêm di rêza T1W de bi zelalî tê xuyang kirin, û sînyala tevlihev û nîşana kêm di rêza T2W de bi zelalî têne xuyang kirin. Ji heyama 12-hefte heya heyama 20-hefte, îşaretên bilind ên sporadîk ên ku li dora sînyalên nizm ên di rêza T2W de kêm dibin.
Di koma NPE de hîperplaziya hestî ya diyar li cîhê împlantasyonê ya laşê vertebral tê dîtin, û hîperplaziya hestî li gorî koma NPE ji 12 heya 20 hefteyan zûtir çêdibe (Wêne. 2C). bodys; Koma Şam û koma ME (Hêjîrê 2C) 2A,B).
(A) Rûyê laşê vertebral li beşa pêçandî pir xweş e, qul baş baş dibe, û di laşê vertebral de hîperplazî tune. (B) Şêweya cîhê ku di koma ME de hatî veguheztin dişibihe ya di koma emeliyata şemitok de, û di xuyangê cîhê ku hatî çandin bi demê re guheztinek eşkere tune. (C) Hîperplaziya hestî li cîhê pêçandî di koma NPE de çêbû. Hîperplaziya hestî bi lez zêde bû û tewra di nav dîska intervertebral de berbi laşê vertebral ê dijberî ve jî dirêj bû.
Analîzên histolojîk di derbarê avakirina hestî de agahdariya berfirehtir peyda dike. Wêneyên beşên piştî emeliyatê yên ku bi H&E hatine xêzkirin nîşan dide. Di koma emeliyata xapînok de, chondrocytes baş hatine rêz kirin û pirbûna şaneyê nehate tespît kirin (Hêl. 3A). Rewşa di koma ME de dişibihe ya di koma operasyonên xapînok de (Wêne. 3B). Lêbelê, di koma NPE de, hejmareke mezin a chondrocytes û belavbûna şaneyên mîna NP-ê li cîhê vegirtinê hate dîtin (Wêne. 3C);
(A) Trabeculae li nêzîkê plakaya paşîn têne dîtin, kondrosît bi rengek û şeklê hucreyek yekgirtî û bê zêdebûn (40 carî) bi rêkûpêk hatine rêz kirin. (B) Rewşa cîhê vegirtinê di koma ME de mîna ya koma şam e. Trabeculae û chondrocytes têne dîtin, lê li cîhê vegirtinê (40 carî) zêdebûnek eşkere tune. (B) Tê dîtin ku kondrosît û şaneyên mîna NP-ê bi girîngî zêde dibin, û şekl û mezinahiya kondrosîtan nehevseng in (40 carî).
Îfadeya mRNA ya interleukin 4 (IL-4), mRNA ya interleukin 17 (IL-17), û mRNA ya interferon γ (IFN-γ) di her du komên NPE û ME de hatin dîtin. Dema ku astên derbirînê yên genên armanc hatin berhev kirin, vegotinên genê yên IL-4, IL-17, û IFN-γ di koma NPE de li gorî yên koma ME û koma operasyona sham bi girîngî zêde bûn (Wêne. 4). (P <0,05). Li gorî koma operasyona sham, asta îfadeya IL-4, IL-17, û IFN-γ di koma ME de tenê hinekî zêde bû û negihîşt guhertina statîstîkî (P> 0.05).
Ragihandina mRNA ya IL-4, IL-17 û IFN-γ di koma NPE de ji yên di koma operasyona sham û koma ME de meylek girîngtir nîşan da (P <0.05).
Berevajî vê, asta vegotinê di koma ME de cûdahiyek girîng nîşan neda (P> 0.05).
Analîza blota rojavayî bi karanîna antîpotên bazirganî yên berdest li dijî IL-4 û IL-17 hate kirin da ku şêwaza îfadeya mRNA ya guhertî piştrast bike. Wekî ku di Figure 5A,B de tê xuyang kirin, li gorî koma ME û koma operasyona sham, asta proteîna IL-4 û IL-17 di koma NPE de bi girîngî zêde bû (P <0.05). Li gorî koma operasyona sham, astên proteîn ên IL-4 û IL-17 di koma ME de jî negihîştin guhertinên girîng ên statîstîkî (P> 0.05).
(A) Asta proteîna IL-4 û IL-17 di koma NPE de ji yên di koma ME û koma placebo de girîngtir bû (P <0.05). (B) Histograma blota rojavayî.
Ji ber hejmarek sînordar a nimûneyên mirovî yên ku di dema emeliyatê de hatine bidestxistin, lêkolînên zelal û berfireh li ser pathogenesis MC hinekî dijwar in. Me hewl da ku modelek heywanî ya MC saz bikin da ku mekanîzmayên patholojîkî yên potansiyel lêkolîn bikin. Di heman demê de, nirxandina radyolojîk, nirxandina histolojîk û nirxandina biyolojîkî ya molekulî hate bikar anîn da ku qursa MC-ya ku ji hêla autograftê NP ve hatî çêkirin bişopînin. Wekî encamek, modela implantasyona NP-ê bû sedema guherînek gav bi gav di tundiya sînyalê de ji xalên demê yên 12-hefte berbi 20-hefteyan (di rêzikên T1W de îşaretek kêm tevlihev û di rêzikên T2W de îşaretek kêm), guhertinên tevnvîsê, û histolojîk û molekulî destnîşan dike. nirxandinên biyolojîkî encamên lêkolîna radyolojîk piştrast kir.
Encamên vê ceribandinê destnîşan dikin ku guhertinên dîtbar û histolojîk li cîhê binpêkirina laşê vertebral di koma NPE de çêbûne. Di heman demê de, vegotina genên IL-4, IL-17 û IFN-γ, û her weha IL-4, IL-17 û IFN-γ hatin dîtin, ku nîşan dide ku binpêkirina şaneya pulposusê ya navokê ya otolog di nav vertebral de. laş dibe sedema rêze guheztinên nîşan û morfolojîk. Hêsan e ku meriv bibîne ku taybetmendiyên nîşana laşên vertebral ên modela heywanan (nîşana kêm di rêza T1W de, sînyala tevlihev û di rêza T2W de nîşana kêm) pir dişibin yên hucreyên vertebral ên mirovan, û taybetmendiyên MRI jî çavdêriyên histolojî û anatomiya gross piştrast bikin, ango, guhertinên di hucreyên laşê vertebral de pêşverû ne. Her çend dibe ku bersiva înflamatuar a ku ji hêla trawmaya akût ve hatî çêkirin zû piştî quncikê xuya bibe, encamên MRI destnîşan kir ku guheztinên îşaretan ên ku bi pêşkeftî zêde dibin 12 hefte piştî quncikê xuya bûn û heya 20 hefte dom kir bêyî ku nîşanên başbûn an paşvebirina guheztinên MRI-yê bidin. Van encaman destnîşan dikin ku NP-ya vertebral a otolog rêbazek pêbawer e ji bo sazkirina MV-ya pêşkeftî di kevroşkan de.
Ev modela qulandinê jêhatîbûn, dem û hewldana neştergerî hewce dike. Di ceribandinên pêşîn de, veqetandin an teşwîqkirina zêde ya strukturên ligamentous ên paravertebral dibe ku bibe sedema damezrandina osteophytes vertebral. Divê baldar be ku zirarê nede dîskên cîran an aciz neke. Ji ber ku kûrahiya lêdanê divê were kontrol kirin da ku encamên domdar û ji nû ve werin hilberandin, me bi qutkirina qalikê derziyek 3 mm dirêj bi destan fîşek çêkir. Bikaranîna vê fîşê di laşê vertebral de kûrahiya sondajê ya yekbûyî misoger dike. Di ceribandinên pêşîn de, sê cerrahên ortopedîk ên ku beşdarî operasyonê bûn, dîtin ku derziyên 16-gauge ji derziyên 18-gauge an jî rêbazên din hêsantir dixebitin. Ji bo ku di dema sondajê de ji xwînrijandina zêde dûr nekevin, girtina derzîyê ji bo demekî sekinî dê qulikek têketina maqûltir peyda bike, û destnîşan dike ku astek diyar a MC dikare bi vî rengî were kontrol kirin.
Her çend gelek lêkolînan MC hedef girtine jî, hindik di derbarê etiolojî û pathogenesis MC25,26,27 de têne zanîn. Li ser bingeha lêkolînên me yên berê, me dît ku xweserî di rûdan û pêşkeftina MC12 de rolek sereke dilîze. Vê lêkolînê îfadeya mîqdar a IL-4, IL-17, û IFN-γ, ku rêyên bingehîn ên cihêrengiya hucreyên CD4 + in piştî stimulasyona antîgenê vekolîn. Di lêkolîna me de, li gorî koma neyînî, koma NPE xwedan îfadeya bilind a IL-4, IL-17, û IFN-γ bû, û astên proteîn ên IL-4 û IL-17 jî bilindtir bûn.
Ji hêla klînîkî ve, îfadeya mRNA ya IL-17 di hucreyên NP de ji nexweşên bi herniya dîskê zêde dibe28. Zêdebûna astên vegotina IL-4 û IFN-γ jî di modelek herniya dîskê ya akût a ne-kompresîf de li gorî kontrolên saxlem29 hate dîtin. IL-17 di nexweşiyên otoîmmune30 de di iltîhaba, birîna tevnvîsê de rolek sereke dilîze û berteka xweparastinê ya IFN-γ31 zêde dike. Birîna tevnê ya bi navbeynkariya IL-17-ê ya pêşkeftî di mêşên MRL/lpr32 û mêşên hesas ên xweseriyê33 de hate ragihandin. IL-4 dikare vegotina sîtokînên proînflamatuar (wekî IL-1β û TNFα) û aktîvkirina makrofage34 asteng bike. Hat ragihandin ku îfadeya mRNA ya IL-4 di koma NPE de li gorî IL-17 û IFN-γ di heman demê de cûda bû; Vebijandina mRNA ya IFN-γ di koma NPE de ji ya di komên din de girîngtir bû. Ji ber vê yekê, hilberîna IFN-γ dibe ku navbeynkarek bersiva înflamatuar a ku ji hêla navbeynkariya NP ve hatî çêkirin be. Lêkolînan destnîşan kir ku IFN-γ ji hêla cûrbecûr hucreyan ve tê hilberandin, di nav de şaneyên T arîkar ên celeb 1, hucreyên kujer ên xwezayî, û makrofage35,36, û cytokinek sereke ya pro-înflamatuar e ku bersivên nesaxiyê pêşve dike37.
Ev lêkolîn pêşniyar dike ku dibe ku bersiva otoîmmune di rûdan û pêşveçûna MC de beşdar bibe. Luoma et al. dît ku taybetmendiyên nîşana MC û NP-ya berbiçav li ser MRI-yê wekhev in, û her du jî di rêza T2W de îşaretek bilind nîşan didin38. Hin cytokines hatine pejirandin ku ji nêz ve bi rûdana MC re têkildar in, wekî IL-139. Ma et al. Pêşniyar kir ku berbi jor an berjêr vekêşana NP dibe ku bandorek mezin li ser rûdan û pêşkeftina MC12 bike. Bobechko40 û Herzbein et al.41 ragihandin ku NP tevnek immunotolerant e ku ji zayînê ve nikare bikeve nav gerîdeya damarî. Pêşveçûnên NP-ê laşên biyanî dixe nav dabînkirina xwînê, bi vî rengî navbeynkariya reaksiyonên otoîmmune yên herêmî dike42. Reaksiyonên otoîmmune dikarin hejmareke mezin ji faktorên xweparastinê derxînin, û dema ku ev faktor bi berdewamî li ber tevneyan têne xuyang kirin, ew dikarin bibin sedema guhertinên di sînyalan de43. Di vê lêkolînê de, zêde îfadekirina IL-4, IL-17 û IFN-γ faktorên nepenî yên tîpîk in, ku pêwendiya nêzîk di navbera NP û MCs44 de bêtir îsbat dikin. Ev modela heywanan baş pêşkeftina NP û ketina nav plakaya paşîn teqlîd dike. Vê pêvajoyê bêtir bandora xweseriya xweseriyê li ser MC eşkere kir.
Wekî ku tê hêvî kirin, ev modela heywanan ji me re platformek mimkun peyda dike ku MC-ê bixwînin. Lêbelê, vê modelê hîn jî hin sînor hene: Ya yekem, di qonaxa çavdêriya heywanan de, hin kevroşkên qonaxa navîn hewce ne ku ji bo ceribandina biyolojiya histolojîk û molekulî werin efxan kirin, ji ber vê yekê hin heywan bi demê re "ji karanîna xwe derdikevin". Ya duyemîn jî, her çend sê xalên demê di vê lêkolînê de hatine destnîşan kirin, mixabin, me tenê celebek MC model kir (Guherîna Modic type I), ji ber vê yekê ew ne bes e ku meriv pêvajoya pêşkeftina nexweşiya mirovî temsîl bike, û pêdivî ye ku bêtir xalên demê bêne danîn. çêtir hemî guheztinên sînyalê temaşe bikin. Ya sêyemîn, guheztinên di strukturên tevnvîsê de bi rastî dikarin bi rengkirina histolojîkî bi zelalî werin xuyang kirin, lê hin teknîkên pispor dikarin di vê modelê de guhertinên mîkrostruktural çêtir eşkere bikin. Mînakî, mîkroskopiya ronahiya polarîzekirî hate bikar anîn da ku damezrandina fibrokartilage di dîskên navvertebral ên kevroşkê de analîz bike45. Bandorên demdirêj ên NP-ê li ser MC û endplate lêkolînek bêtir hewce dike.
Pêncî û çar kevroşkên spî yên Zelandaya Nû (giraniya wan bi qasî 2,5-3 kg, temenê 3-3,5 meh) bi korfelaqî li koma operasyonê ya xapînok, koma implantasyona masûlkeyê (koma ME) û koma implantasyona rahên nervê (koma NPE) hatin dabeş kirin. Hemî prosedurên ceribandinê ji hêla Komîteya Ethîkê ya Nexweşxaneya Tianjin ve hatine pejirandin, û rêbazên ceribandinê li gorî rêwerzên pejirandî hatine bicîh kirin.
Di teknîka cerrahî ya S. Sobajima 46 de hin pêşketin hatine çêkirin. Her kêvroşk di pozîsyonek paşîn a paşîn de hate danîn û rûbera pêşîn a pênc dîskên navvertebral ên paşîn ên paşîn (IVD) bi karanîna nêzîkatiyek retroperitoneal a posterolateral hate xuyang kirin. Ji her keroşkekê re anesthesiya giştî hat dayîn (20% urethane, 5 ml/kg bi rêya damarê guh). Birînek çermê dirêjî ji keviya jêrîn a rikan heya berika pelvîk, 2 cm ventral heya masûlkeyên paravertebral hate çêkirin. Pişka anterolateralî ya rastê ji L1 heta L6 bi veqetandina tûj û berteng a tevna binê çerm, tevna retroperitoneal, û masûlkan ve hat xuyang kirin (Wêne. 6A). Asta dîskê ji bo asta dîskê L5-L6 bi karanîna keviya pelvîk wekî nîşanek anatomîkî hate destnîşankirin. Derziyek derziyê ya 16-gauge bikar bînin da ku qulikek li nêzê plakaya dawiya vertebra L5 bi kûrahiya 3 mm vekin (Hêjîra 6B). Sirincek 5 ml bikar bînin ku di dîska intervertebral L1-L2 de navokê otolog palpişt bike (Hêjîra 6C). Li gorî hewcedariyên her komê nucleus pulposus an masûlkeyê derxînin. Piştî ku qulika lêdanê kûr dibe, dirûyên vegirtinê li ser fasiya kûr, fasiya rûpî û çerm têne danîn, di dema neştergeriyê de balê dikişînin ku zirarê nede tevna periosteal a laşê vertebral.
(A) Dîska L5-L6 bi rêgezek retroperitoneal a posterolateral ve tê xuyang kirin. (B) Derziyek 16-gauge bikar bînin da ku qulikek li nêzê plakaya dawiya L5 derxînin. (C) MFyên xweser têne berhev kirin.
Anesthesiya giştî bi 20% urethane (5 ml/kg) ku bi riya damarê guh ve tê rêve kirin, û radyografiya stûna lumbar di hefteyên 12, 16 û 20 piştî emeliyatê de hate dubare kirin.
Kîroşk bi derzîlêdana intramuskuler a ketamine (25,0 mg/kg) û pentobarbital sodyûmê hundurîn (1,2 g/kg) di 12, 16 û 20 hefteyên piştî emeliyatê de hatin qurbankirin. Tevahiya spine ji bo analîzkirina histolojîk hate rakirin û analîzek rastîn hate kirin. Veguheztina berevajî ya hêjmar (RT-qPCR) û blota rojavayî ji bo tespîtkirina guheztinên di faktorên berevaniyê de hatine bikar anîn.
Muayeneyên MRI-yê di kevroşkan de bi karanîna magnetek klînîkî ya 3.0 T (GE Medical Systems, Florence, SC) ku bi wergirek kulîlka lingê ortogonal ve hatî çêkirin hate kirin. Kîroşk bi 20% urethane (5 mL/kg) bi riya damarê guhê hatin anestez kirin û dûv re di hundurê magnetîkê de bi paldankê ve hatin danîn bi devera lumbar ya ku navenda wê li ser kulîlkek rûkalê 5 înç e (GE Medical Systems). Wêneyên herêmîker ên bi giraniya Coronal T2 (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) hatin bidestxistin da ku cîhê dîska lumbar ji L3-L4 heya L5-L6 diyar bikin. Parçeyên bi giraniya T2 ya balafira Sagittal bi van mîhengan hatin bidestxistin: rêzika spin-echo ya bilez bi dema dubarekirinê (TR) 2200 ms û dema echo (TE) ya 70 ms, matrix; qada dîtbarî ya 260 û heşt teşwîqan; Stûrahiya jêkirinê 2 mm, valahî 0,2 mm bû.
Piştî ku fotografa dawîn hat kişandin û kevroşka dawî hat kuştin, dîskên şam, masûlke û NP ji bo lêkolîna histolojîk hatin rakirin. Tîlan di 1 hefteyekê de di formalina tamponkirî ya bêalî ya 10% de hate sabît kirin, bi ethylenediaminetetraacetic acid hate dekalsîkirin, û parafîn hate dabeş kirin. Blokên tîrêjê di parafînê de hatin bicîkirin û bi karanîna mîkrotomê li beşên sagittal (5 μm stûr) hatin qut kirin. Beş bi hematoxylin û eosin (H&E) hatin boyaxkirin.
Piştî komkirina dîskên navvertebral ji kevroşkên her komê, RNA-ya tevahî bi stûnek UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Chinaîn) li gorî rêwerzên çêker û pergalek veguheztina berevajî ya ImProm II (Promega Inc.) hate derxistin. , Madison, WI, USA). Veguhastina berevajî hate kirin.
RT-qPCR bi karanîna Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., USA) û SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) li gorî rêwerzên çêker hate kirin. Hêjeya reaksiyonê ya PCR 20 μl bû û 1,5 μl cDNA-ya hûrkirî û 0,2 μM ji her destpêkek heye. Primer ji hêla OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) ve hatî çêkirin û ji hêla Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Çîn) ve hatî çêkirin (Table 1). Şert û mercên gerîdeya germê yên jêrîn hatin bikar anîn: gava destpêkê ya aktîvkirina polîmerazê li 94 °C ji bo 2 hûrdem, paşê 40 çerxên 15 s her yek li 94 °C ji bo denaturasyona şablonê, helandin ji bo 1 hûrdeman li 60 °C, dirêjkirin, û floransence. Pîvandin 1 hûrdem li 72°C hatin kirin. Hemî nimûne sê caran hatin zêdekirin û nirxa navîn ji bo analîza RT-qPCR hate bikar anîn. Daneyên zêdekirinê bi karanîna FlexStation 3 (Alavên Molecular, Sunnyvale, CA, USA) hatin analîz kirin. IL-4, IL-17, û îfadeya genê IFN-γ ji bo kontrola endogenous (ACTB) normal kirin. Asta vegotina têkildar a mRNA ya armanc bi karanîna rêbaza 2-ΔΔCT hate hesibandin.
Proteîna tevahî ji tevnvîsê bi karanîna homojenîzatorek tevnvîsê di tamponek lîza RIPA de (kokteylek înhîbîtorê proteaz û fosfatazê vedihewîne) ji destan hate derxistin û dûv re di 13,000 rpm de ji bo 20 deqîqeyan li 4 ° C santrîfuj kirin da ku bermahiyên tevnvîsê werin rakirin. Pêncî mîkrogramên proteîn li her rêkê hatin barkirin, ji hêla 10% SDS-PAGE ve hatî veqetandin, û dûv re veguheztin membranek PVDF. Astengkirin di şîrê hişk ê 5% bêrûn de di salona Tris-buffered (TBS) ya ku %0.1 Tween 20 dihewîne ji bo 1 demjimêran li germahiya odeyê hate kirin. Parzûn bi antîbodya seretayî ya antî-dekorîn a keroşkê (1:200 rijandin; Boster, Wuhan, Çîn) (1:200; Bioss, Pekîn, Chinaîn) bi şev di 4°C de hate înkubakirin û di rojên duyemîn de bertek nîşan da; bi antîpota duyemîn (immunoglobulin G antî-kevroşkê G bizinê li 1:40,000 rijandin) bi peroksîdaza hespê (Boster, Wuhan, Chinaîn) 1 saetê li germahiya odeyê tê hev kirin. Nîşaneyên blota rojavayî piştî tîrêjkirina tîrêjê ya X-ê bi zêdebûna kîmyewîtîya li ser membrana kîmyewî hatin dîtin. Ji bo analîza densîtometrî, blot bi karanîna nermalava BandScan ve hatin şopandin û hejmartin û encam wekî rêjeya immunoreaktîvîteya genê armanc ji immunoreactivity tubulin re hate destnîşan kirin.
Hesabên îstatîstîkî bi karanîna pakêta nermalava SPSS16.0 (SPSS, USA) hatin kirin. Daneyên ku di dema lêkolînê de hatine berhev kirin wekî navînî ± veguheztina standard (navgînî ± SD) hate destnîşan kirin û bi karanîna analîza tedbîrên dubarekirî ya yekalî (ANOVA) hate analîz kirin da ku cûdahiyên di navbera her du koman de diyar bikin. P <0.05 ji hêla îstatîstîkî ve girîng hate hesibandin.
Ji ber vê yekê, damezrandina modelek heywanî ya MC-ê bi danîna NP-yên otolog di laşê vertebral de û pêkanîna çavdêriya makroanatomîkî, analîza MRI, nirxandina histolojîk û analîza biyolojiya molekulî dibe ku bibe amûrek girîng ji bo nirxandin û têgihîştina mekanîzmayên MC-ya mirovan û pêşxistina dermanên nû. destwerdanên.
Meriv çawa vê gotarê vedibêje: Han, C. et al. Modelek heywanan a guheztinên Modic bi danîna nucleus pulposus a autologous di hestiyê subkondral a stûna lumbar de hate damezrandin. Sci. 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., and Boos, N. Wêneya resonansê ya magnetîkî ya stûna lumbar: berbelavbûna herniya dîskê û ragirtinê, pêçandina rayê nervê, anormaliyên paşîn ên paşîn, û osteoarthritis hevbeş a rûyê di dilxwazên asîmptomatîkî de . qûrs. Radyolojî 209, 661–666, doi:10.1148/radyolojî.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, û Leboeuf-Eed, K. Modic Guherandinên û têkiliya wan bi dîtinên klînîkî. Kovara Ewropî ya Spine: Weşana fermî ya Civaka Ewropî ya Ewropî, Civata Ewropî ya Deformasyona Spinal, û Civaka Ewropî ji bo Lêkolîna Spîna Cervical 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M., et al. Guhertinên modîk ên di paçikên paşîn ên vertebral ên lumbar de: belavbûn û têkiliya bi êşa pişta nizm û sciatica re di karkerên mêr ên navîn de. Spine 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., û Dalinka, M. MRI ya mêjûya hestî di nexweşiya dejenerasyonê ya stûna lumbar de li nêzî plakaya dawîyê diguhezîne. AJR. American Journal of Radiology 149, 531-534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, û Carter, JR Nexweşiya dîskê dejeneratîf: nirxandina guhertinên mêjûya vertebral bi MRI. Radyolojî 166, 193–199, doi:10.1148/radyolojî.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS, û Carter, JR Wêneya nexweşiya dîska dejeneratîf. Radyolojî 168, 177-186, doi: 10.1148/radyolojî.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Pêşbînkerên dawiya neovertebral (Modic) guheztinên di nifûsa giştî de nîşan didin. Rojnameya Ewropî ya Spine: Weşana Fermî ya Civaka Spine ya Ewropî, Civata Ewropî ya Deformasyona Spinal, û Civaka Ewropî ya Lêkolîna Spîna Servîkî, Dabeş 19, 129-135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (201).
Albert, HB û Mannisch, K. Modic piştî herniya dîska lumbar diguhere. Kovara Ewropî ya Spine: Weşana Fermî ya Civaka Ewropî ya Ewropî, Civata Ewropî ya Deformasyona Spinal û Civaka Ewropî ya ji bo Lêkolîna Spîna Cervical 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., û Kaapa, E. Modic guhertoyên tîpa I dikarin dejenerasyona dîskê ya deformasyonê ya bilez pêşkeftî pêşbîn bikin: lêkolînek paşerojê ya 1-salî. Ewropî Spine Journal 21, 1135-1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Guhertinên Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ û Fan, SW Modic: Sedemên mimkun û tevkariya dejenerasyona dîska lumbar. Hîpotezên bijîjkî 73, 930-932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Şikandina dîska navxweyî. Pirsgirêkên prolapsa dîskê zêdetirî 50 sal in. Spine (Phila Pa 1976) 11, 650-653 (1986).
Dema şandinê: Dec-13-2024